如何正确调节尼康显微镜的柯勒照明？

柯勒照明是显微镜成像的关键技术，可提供均匀、无眩光的高质量图像。尼康显微镜通常采用这一照明方式，适用于明场、暗场、相差和荧光观察。以下是详细的调节步骤及注意事项。

一、柯勒照明的原理

柯勒照明的核心是使光源通过聚光镜和光阑系统，均匀照亮样品，同时避免杂散光干扰。其优势包括：

均匀照明：减少光强不均导致的成像偏差。

减少眩光：提高对比度和分辨率。

延长光源寿命：避免过度聚焦导致灯泡过热。

二、调节步骤（以尼康Eclipse显微镜为例）

1. 准备工作

打开显微镜电源，确保光源稳定（卤素灯需预热1-2分钟）。

放置样品，使用10×物镜，调至清晰聚焦。

打开视场光阑和孔径光阑。

2. 调节视场光阑

步骤：

缩小视场光阑，在视野中可见一个多边形的光斑。

调节聚光镜高度旋钮，使光斑边缘清晰锐利。

缓慢扩大视场光阑，直至光斑刚好超出视野范围。

3. 调节孔径光阑

步骤：

取下目镜，通过目镜筒观察。

调节孔径光阑，使其开口约为物镜孔径的60-80％。

4. 中心对齐聚光镜

若光斑偏离视野中心，使用聚光镜的调节螺丝使其居中，确保照明对称。

5. 验证与微调

切换至高倍物镜，重复调节孔径光阑至合适大小。

观察样品成像：若出现明暗不均或眩光，重新检查光阑和聚光镜位置。

三、注意事项

光源亮度：避免过强光照导致样品褪色或相机过曝，可通过中性密度滤光片调节。

油镜使用：100×油镜需在聚光镜上滴加浸油，确保光路连续。

荧光观察：柯勒照明需关闭透射光，仅用荧光激发光源。

定期检查：聚光镜污染或光阑错位会影响成像，需定期清洁和校准。

四、常见问题

成像不均匀：检查视场光阑是否完全打开，聚光镜是否居中。

分辨率不足：孔径光阑可能过小，或聚光镜未调至正确高度。

杂散光干扰：确保光路清洁，避免镜片有指纹或灰尘。

结论

正确调节柯勒照明是获得高质量显微镜图像的基础。尼康显微镜的设计便于用户精准控制光路，通过上述步骤可优化照明均匀性、对比度和分辨率。熟练掌握后，可显著提升明场、相差或荧光成像的效果。